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前言 随着工业化、城市化、农村集约化进程的加快，人为地排入大气、水体和土壤的重金属日益增多。在一定条件下,某些重金属（例如Pb2+）能在某些微生物的作用下转化为毒性更大的有机物质。另外,有毒重金属Pb2+可以长期停留与积累在环境中,通过食物链逐级富集,最终进入人体影响神经、造血、消化、泌尿、生殖和发育、心血管、内分泌、免疫、骨骼等各类器官，主要的靶器官是神经系统和造血系统。更为严重的是它可以通过遗传或母乳使婴幼儿的生长和智力发育，损伤认知功能、神经行为和学习记忆等脑功能受害, 严重者造成痴呆。因此，开展重金属Pb2+对典型细菌的胁迫生理毒性研究尤为重要。 内容来自www.paper51.com 开展重金属Pb2+对典型细菌的胁迫生理毒性研究是从环境微生物学的角度，在实验室条件下，以革兰氏阴性大肠杆菌 http://www.paper51.com 1 实验材料 内容来自论文无忧网 www.paper51.com 1.1实验供试菌种 paper51.com
大肠杆菌 copyright paper51.com
1.2实验用品 http://www.paper51.com 1.2.1培养基 http://www.paper51.com 大肠杆菌 copyright paper51.com 1.2.2实验试剂 内容来自论文无忧网 www.paper51.com 溶液I－GET缓冲液、溶液II、溶液III－乙酸钾溶液、苯酚/氯仿/异戊醇溶液、TE缓冲液或双蒸水、5%～6%氨水、95%无水乙醇、70％乙醇、蒽酮、浓硫酸、葡萄糖标准液等。 paper51.com 1.2.3实验器材 http://www.paper51.com 712可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司制造）、Ar1140电子天平（上海梅特勒一托利多仪器有限公司）、YXQ-LS-50SII立式压力蒸汽灭菌器（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）、ZHWY-11020恒温培养振荡器（上海仪器制造厂）、PH030A恒温培养箱（上海一恒科学仪器有限公司）、垂直流超净工作台（上海智诚分析仪器制造有限公司）、P270普通摇床、1cm光径石英比色杯、冷冻高速离心机等。 内容来自论文无忧网 www.paper51.com 2 实验方案设计与方法 http://www.paper51.com 两菌种经过24h、35℃条件下培养后用5ml无菌水洗脱斜面于液体培养基中，常温条件下摇瓶培养24h，按10%的接种量分别接种于添加了重金属Pb2+的完全培养基上，培养基中分别添加Pb Cl2,其质量浓度分别为0、10、20、30、40、60、80、100、160、200mg·L-1, 35℃条件下恒温摇瓶培养，在试验实施时根据不同微生物对重金属的敏感程度加以取舍，以不添加重金属离子的培养基作为对照(以CK表示)，测定重金属Pb2+对不同微生物菌株的毒性影响，具体测定方法如下： 内容来自论文无忧网 www.paper51.com 2.1 Pb2+胁迫下微生物的生长曲线测定 copyright paper51.com
大肠杆菌、枯草芽孢杆菌预培养24 h，取20.0mL菌液接种于含不同质量浓度重金属的液体培养基中（加入不同质量浓度重金属铅的培养液200mL，121℃灭菌30 min），每个质量浓度梯度平行3次，恒温摇床培养，连续培养30 h，以光密度值（OD值）为纵坐标，培养时间t（h）为横坐标，绘制出不同微生物在重金属Pb2+胁迫时的生长曲线[5]。本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液与浑浊度成正比，因此用紫外分光光度计吸收法测定细菌悬液在600nm处的光密度OD值，间隔2h/次，共测定记录15组数据。 http://www.paper51.com |